蜂蜜中寡糖的鑒定

    蜂蜜的主要成分為果糖、葡萄糖和水。目前市場出現的假蜂蜜中常常添加大量糖漿，含有較多寡糖成分。通過檢測蜂蜜樣品中的是否出現寡糖，能快速、可靠地鑒別常規摻假蜂蜜。

一、實驗目的

本實驗以固相萃取法對市售蜂蜜進行樣品前處理，聯合薄層色譜，檢測蜂蜜中的寡糖成分，以此鑒定蜂蜜是否摻假。該方法可準確鑒別常規摻假蜂蜜，簡單可靠，并能減少有機溶劑的使用量。

二、實驗目標物：寡糖。

三、適用范圍：《中.華人民共和國藥典2015版一部·蜂蜜》。

四、方法原理：試樣中的高分子糖，經活性炭-硅藻土小柱的富集、濃縮，再用薄層色譜法分離、檢測。經過與摻有一定含量的麥芽五糖的純蜂蜜比較，來判定蜂蜜中寡糖的存在。

五、實驗方法

1、樣品處理：取樣品 2g，置燒杯中，加入10mL水徹底溶解。

2、蜂蜜專用柱凈化

（1）活化：25mL水，過柱速度1秒/滴（用超純水活化小柱時，注意在液面下降至小柱填料上端時，可添加樣品溶液上樣，切記活化過程中不能將液面抽干，否則會影響小柱對寡糖的保留效果）

（2）上樣：在50mL燒杯中稱取2g樣品溶于10mL水后，緩慢加入到蜂蜜專用柱上（需要用固相萃取裝置，抽取一定的真空度以確保液體能夠滴出小柱）

（3）淋洗：用7%乙醇25mL淋洗，不收集淋洗液

（4）洗脫：用50%乙醇10 mL洗脫，收集洗脫液

（5）濃縮：收集的洗脫液置于65 ℃水浴中減壓濃縮至干（旋蒸濃縮的時候25mL雞心瓶，防止損失樣品；可以少量多次地添加溶劑進行復溶）

（6）復溶：殘渣加30%乙醇1mL使之溶解，搖勻。溶解時候要注意確保殘渣完全復溶

3、薄層色譜條件

薄層板：硅膠G 薄層板，110℃活化1小時

展開劑：正丙醇-水-三乙胺（60:30:0.7）

點樣量：3uL

顯色劑：苯胺-二苯胺-磷酸的混合溶液(取二苯胺1g，苯胺1mL，磷酸5mL，加丙醇至50mL，混勻）

顯色方法：噴以顯色劑，105 ℃加熱至斑點顯色清晰，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應位置的下方，應不得顯斑點。

六、實驗結果與判斷標準

從恒溫干燥箱中取出薄層板，觀察TLC板的顯況，純蜂蜜只在Rf值0.35以上的區域有2~3個藍色中帶灰色或咖啡色的斑點，相比較麥芽五糖或混有麥芽五糖的蜂蜜卻是從原點開始呈現藍色帶狀樣的斑點群。